Masson三色染色

简介：

身体内随处可见的结缔组织，由细胞、纤维和基质构成，其中以胶原、弹力和网状纤维为主。在HE染色中，这三种纤维经常难以区分，尤其在病理情况下，如增生、萎缩等变化发生时，就必须借助特殊染色进行准确鉴别。Masson三色染色技术是结缔组织染色中最具代表性的方法，被认为是胶原纤维染色的典范技术。

实验原理：

Masson三色染色是结缔组织染色中最经典的一种方法,又称马松染色,是显示组织中纤维的主要方法之一,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。Masson染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色或蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。胶原纤维在HE染色中呈均一的粉红色，与周围间质区分不是很清楚。Masson染色后，便可明显区别开来，易于观察病变时胶原纤维的变化。

试剂配制：

1、Regaud 氏苏木精：苏木精 1 g，95% 酒精 10 ml，甘油 10 ml，蒸馏水 80 ml。将苏木精加入蒸馏水内加温溶解，冷却后加入酒精和甘油，放数日后即可应用；
2、Masson 丽春红酸性复红液：丽春红 0.7 g，酸性复红 0.3 g，蒸馏水 99 ml，无水乙酸 1 ml；
3、0.2% 无水乙酸水溶液：无水乙酸 0.2 ml，蒸馏水 100 ml；
4、1% 磷钼酸水溶液：磷钼酸 1 g，蒸馏水 100 ml；
5、苯胺蓝水溶液：苯胺蓝 2 g，蒸馏水 98 ml，无水乙酸 2 ml；
6、1% 光绿水溶液：光绿 1 g，蒸馏水 100 ml。

实验步骤：

1、石蜡切片脱蜡至水。
2、铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。其步骤如下:
(1) 切片脱蜡后于 0.5% 碘酒精作用 10 分钟；(2) 流水稍洗；(3) 5% 硫代硫酸钠作用 5 分钟；(4) 流水冲洗 10 分钟。
3、依次自来水和蒸馏水洗。
4、用 Regaud 苏木精染液或 Weigert 苏木精液染核 5~10 min。
5、充分水洗，如过染可盐酸酒精分化。
6、蒸馏水洗。
7、用 Masson 丽春红酸性复红液 5~10 min。
8、以 2% 无水乙酸水溶液浸洗片刻。
9、1% 磷钼酸水溶液分化 3~5 min。
10、不经水洗，直接用苯胺蓝或光绿液染 5 min。
11、以 0.2% 无水乙酸水溶液浸洗片刻。
12、95% 酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。

实验结果：

胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色；肌纤维、纤维素和红细胞呈红色；细胞核呈蓝黑色。

（图片来源于网络）

常见问题：

一、染色易脱片。
解决方法：
1、组织本身破碎或过硬等，用防脱载玻片解决;
2、脱水、透明不足，重新脱水透明浸蜡;
3、脱水、透明过度，用酒精甘油各半浸泡切面后再切片。
4、切片过厚，厚薄均匀切片。

二、切片染色不匀。
解决方法：
1、取材固定不当，取材规范标准，固定彻底；
2、脱水不够，重新脱水，透明，浸蜡。

三、切片染色模糊不清。
解决方法：
1、包埋蜡温过高；
2、分化过度；
3、脱水透明不彻底。

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资料格式：

Masson染色.docx

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