公司新闻/正文
慢病毒包装到底是什么?这篇指南带你一一了解
人阅读 发布时间：2024-03-26 14:32
慢病毒包装到底是什么?这篇指南带你一一了解
一、慢病毒简介
慢病毒，即拉丁文中的"Lentus"，意为“慢”，得名自其病程缓慢而逐渐进展的特性。作为逆转录病毒家族的一员，慢病毒以其在宿主体内引发退行性疾病的缓慢进展而著称。其特征包括具有包膜的单链RNA病毒，直径约为80-100 nm。慢病毒表现出强烈的宿主特异性，例如，牛免疫缺陷病毒（BIV）仅感染牛，而猫免疫缺陷病毒（FIV）仅感染家猫和大型猫科动物。人类免疫缺陷病毒（HIV）是逆转录病毒家族中最著名的代表之一，其两种类型 HIV-1 和 HIV-2 可引发艾滋病。
慢病毒与其他逆转录病毒的区别在于其基因组包含额外的调节基因，称为辅助基因，使其成为复杂逆转录病毒。例如，nef-（负因子）基因编码一种蛋白质，能够下调 CD4 受体的表达，削弱宿主免疫系统，从而促进病毒的传播。CD4 阳性细胞数量的减少表明存在严重的免疫缺陷。
慢病毒的复制周期与其他逆转录病毒相似。为了将病毒基因组整合到宿主细胞基因组中，需要利用病毒特异性逆转录酶将病毒RNA转录成DNA。与γ逆转录病毒相比，慢病毒能够自行克服受感染细胞的核膜，并且不需要利用细胞分裂来整合其遗传信息到宿主的遗传信息中。这一特性使得慢病毒在研究和治疗应用中具有重要意义。因此，作为病毒载体时，慢病毒能够在细胞周期的任何阶段转染细胞，包括静止或分裂细胞、永生化或原代细胞系。
二、实验原理
慢病毒包装实验的原理是基于慢病毒表达载体和包装质粒的协同作用。慢病毒表达载体包含了进行包装、转染和稳定整合所需的遗传信息。而慢病毒包装质粒则提供了所有必要的辅助蛋白，包括转录、包装和重组所需的辅助蛋白。
为了产生高滴度的慢病毒颗粒，需要将表达载体和包装质粒共同转染到细胞中，使其在细胞内完成病毒的包装过程。经过包装后，假病毒颗粒会释放到培养基中。收集上清液并经离心处理后，可直接用于感染宿主细胞。一旦目的基因进入宿主细胞，经反转录作用后会整合到宿主基因组中，从而实现高水平的表达效果。
三、慢病毒包装应用
慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1病毒为基础发展起来的基因研究载体，与传统的逆转录病毒载体相比，慢病毒载体具有在分裂和非分裂细胞中感染的能力。
实验平台的慢病毒系统属于第三代慢病毒系统，具有高生物安全性，采用VSVG包膜，宿主范围广泛，病毒滴度高，达到10^9TU/mL。
目前的慢病毒载体提供多种启动子选项，如CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、GFAP、NSE等；同时，也提供多种荧光标记蛋白选择，如EGFP、ZsGreen、tdTomato、mCherry、EYFP等；抗生素筛选基因有Puromycin、Neomycin、Hygromycin等可供选择。
在细胞实验中，慢病毒包装可显著提高难转染细胞（如原代细胞、干细胞、不分化细胞等）的基因转导效率，并增加目的基因整合到宿主细胞基因组中的概率，极大便利了RNAi、cDNA克隆和报告基因的研究。
具体而言，慢病毒包装主要应用于以下几个方面：
对于难转染的细胞，可提高基因转导效率，并增加目的基因整合到宿主细胞基因组中的概率，有利于RNAi、cDNA克隆和报告基因的研究。
用于稳转细胞株的筛选。
为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液。
四、实验方法
五、案例展示
六、常见问题
慢病毒包装过程中常见的问题包括：
1.片段大小控制： 理论上，慢病毒可以包装5～7Kbp的片段，但过大的片段会降低病毒的出毒效率，导致病毒滴度较低，影响感染效果。建议将片段控制在1.5Kbp以内。
2.质粒突变和丢失： 病毒载体易发生突变和丢失，导致包装信号突变或片段丢失，阻碍病毒包装。建议在构建含目的基因的载体后进行测序，确保关键序列正确。
3.选择包装细胞： 建议选择生长旺盛、状态良好的293T或293FT细胞，避免过密生长和过多的体外传代。
4.转染条件优化： 对质粒纯度要求高，最好使用去除内毒素的超螺旋质粒，采用磷酸钙转染方法可以提高转染效率。
5.质粒比例调整： 转染时各质粒的比例对出毒效率影响显著，需要根据质粒比例进行调整和优化。
转染操作细节：转染前细胞密度控制在50％～60％，转染后不换液，但可以在第2天添加(TPA)提高出毒率。
6.病毒收获条件： 一般情况下，转染48h后收获得到的病毒颗粒最多，但细胞状态、生长速度和培养基pH值也会影响病毒收获。
7.血清筛选： 不同厂家和批次的血清对病毒产量影响很大，需要进行筛选。
8.病毒液保存： 避免病毒液反复冻融，以维持效率。
9.保存和检测： 病毒液可保存于-80℃中一年，但建议半年后重新检测病毒滴度。
誉嘉生物可提供“慢病毒包装检测”服务
详情请点击下方图片链接咨询
询价列表
暂时没有已询价产品
