HE 染色实验

简介：

经过包埋的组织在普通玻片上进行切片后，可以使用HE染色，这种方法通过区分细胞核和细胞质的酸碱性特性，将它们染成天蓝和玫红两种鲜艳的颜色，以满足形态学观察的需求。如果需要进行免疫组化或荧光分析，那么在切片时需要在玻片上使用粘片剂，以防止在多个操作步骤中出现掉片的情况。

基本原理：

HE染色方法之所以广泛应用于细胞染色领域，是因为它在化学反应之外还涉及物理吸附和吸收效应，这些效应共同促成了HE染色的出色核浆对比效果。这个方法利用了苏木素染色液的碱性属性，将细胞染成蓝色，以及伊红的酸性属性，将细胞染成红色。结果是，细胞核呈蓝色，细胞质呈红色。这两种不同的染色液通过改变细胞的折射率，使细胞在光镜下呈现出不同的颜色，从而呈现出细胞图像。

实验材料与仪器：

器材：染缸、盖玻片、组织切片
试剂：① C₈H₁₀、② 乙醇、③ 苏木素染液、④ 蒸馏水、⑤ 中性树胶

操作步骤：

1、已烘干的切片在C₈H₁₀中脱蜡 5～10 分钟，两次。
2、移入C₈H₁₀和纯乙醇（1：1）混合液中 5 分钟左右（如经二次C₈H₁₀脱蜡，此步可省略）。
3、移入 100％、95％、85％、70％乙醇中，各级为 2～5 分钟。最后经蒸馏水转入染色液。
4、自己配制或商业化购买的苏木素染液染色 5～15 分钟。
5、流水冲洗 15～30 分钟，或者在 0.75％氯化铵溶液中短时间碱化或蓝化，使细胞核呈蓝色。
6、蒸馏水短洗。
7、依次经 70％、85％、95％乙醇脱水，各级为 2～3 分钟。
8、0.1％～0.5％伊红染液染色 1～5 分钟，若着色困难，可在每 100 ml 染液中加入 1～2 滴无水乙酸，使易着色且不易脱色。
9、依次快速通过 95％和 100％乙醇洗去多余的伊红染液，在浓度 95％以下的乙醇中伊红易脱色，应适当缩短时间。
10、C₈H₁₀透明（二次），共约 10 分钟。
11、封片擦去切片周围多余C₈H₁₀，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固，避免产生气泡。在通风橱中吹干C₈H₁₀，封片稳定后转移到片盒中保存。