免疫荧光（Immunofluorescence, IF）实验方法

实验步骤：
（一）、细胞片制备
具体操作步骤： 

细胞准备。对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。

（二）、固定和通透

具体操作步骤：
固定：根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3×5 min。
通透：使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透后用PBS洗涤3×5 min。

（三）、封闭和抗体孵育

具体操作步骤：
封闭：使用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30min。
一抗结合：室温孵育1h或者4℃过夜。PBST漂洗3次，每次冲洗5min。
二抗结合：间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次，每次冲洗5min后，再用蒸馏水漂洗一次。

（四）、荧光检测

具体操作步骤：
封片及检测：滴加封片剂一滴，封片，荧光显微镜检查。